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021-50760790
產品名稱:

PEG3350溶液(50%,無菌)

 
產品編號: R18959 
供應商: 遠慕生物 
儲存方式: 4℃,6個月 
用途: 聚乙二醇誘導細胞融合,可用作融合劑,以獲得生產單克隆抗體的雜交瘤細胞,誘導細胞雜交。也可用于酵母轉化。 
PEG3350溶液(50%,無菌)
產品名稱:PEG3350溶液(50%,無菌)
規格:100ml/500ml
供應商:上海遠慕生物
分類:細胞培養
儲存條件:室溫,12個月
用途:聚乙二醇誘導細胞融合,可用作融合劑,以獲得生產單克隆抗體的雜交瘤細胞,誘導細胞雜交。也可用于酵母轉化。
注意事項:無菌溶液,由DPBS(pH7.4)和PEG33500或稱聚乙二醇3350組成,經無菌處理。體外培養的單層貼壁細胞或懸浮細胞均可以做融合,但成功概率較大的是單層貼壁細胞。




酵母感受態細胞的制備:
1.活化菌種。-80℃保存的菌種在固體YPDA培養基(YPDA加20g Agar/L)上劃線,在30℃培養2-4天。
2.挑取酵母單菌落在固體YPDA培養基上劃3-5 mm的短線,在30 ℃培養2-4天。待酵母單菌落長至2 mm長時,接種。
3.首先把酵母細胞接種到3 ml液體YPDA培養基中,30℃過夜培養。
4.第二天轉接到含有30 ml液體YPDA培養基的三角瓶中繼續培養,待OD600到0.4-0.5范圍內。收集細胞,1000 g,離心5 min, 去上清。
5.沉淀用30-50 ml的無菌的去離子水懸浮。1000 g,離心5 min,去上清。
6.沉淀用合適體積的100 mM LiAc懸?。?0 ml的酵母菌最多用不超過1 ml的100 mM LiAc懸浮,通常100 μl的酵母細胞用于轉化一個質粒,即一個反應)。
7.把酵母細胞的懸浮液分裝到1.5 ml的離心管中,每管分裝100 μl,用于轉化一個質粒即一個反應。1000 g,離心5 min,去上清。制備好的感受態細胞備用。

酵母轉化:
1.配制預混液,每轉化一個質粒即一個反應需要360 μl的預混液。

50% PEG

240 μl

1 M LiAc

36 μl

Carrier DNA(10 mg/ml)

5 μl

質粒(大約200 ng/μl)

5 μl(根據質粒的濃度加入相應的體積)

總體積

360 μl


2.吸取360 μl的預混液加入到感受態細胞中,用槍頭反復吹吸沉淀,使離心管底的酵母細胞徹底地懸浮在含有PEG的預混液中。
3.放置在30 ℃的水浴鍋中孵育30 min,每10 min混勻一次。
4.放置在42 ℃的水浴鍋中熱擊30 min,每10 min混勻一次。
5.12000 rpm,離心1 min,去掉上清液。
6.沉淀中加入100 μl的無菌的去離子水,懸浮沉淀。
7.把酵母細胞涂到相應的酵母培養基平板上,30℃培養2-4天。


注意事項:
1. 初次使用Carrier DNA,請把裝有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min,然后立即放在冰上,用后放在-20℃儲存備用。下次使用時請在冰上解凍Carrier DNA。
2. PEG溶液在低溫環境下會析出,請于常溫環境下完全溶解后使用。
3. 轉化全程要無菌操作。


注意事項
1.避免接觸眼睛、呼吸系統、皮膚;若誤接觸眼睛,立即用水沖洗或向醫生咨詢;
2.由于組織或細胞性質不同,實驗人員應依據具體情況,確定**消化時間;消化細胞時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁和生長狀況;
3.本產品不含抑菌劑,在使用過程中要特別注意無菌操作,避免消化液被微生物污染,大包裝,建議無菌分裝保存;
4.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。



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