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無血清培養基的適應性解析

2021-09-08 11:05 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
細胞培養實驗中,培養基有著不可取代的地位。大家知道,血清是的天然培養基,而無血清培養基也有著功不可沒的作用,被廣泛的應用于培養哺乳動物和無脊椎動物細胞以制備單克隆抗體,病毒抗原和重組蛋白等。遠慕生物為您分析解說無血清培養基在細胞培養實驗中的適應性:

一、適應方法

1.直接適應細胞從血清的培養基為基。

2.連續的適應或脫機細胞從血清的培養基為SFM在幾個步驟。

連續的適應往往是細胞比直接適應嚴酷少。

二、連續的適應

通道1,75%血清的培養基:25%基

通道2,50%血清的培養基:50%基

通道3,25%血清的培養基:75%基

從75%到100%的變化可能是太緊張的SFM細胞,可能需要把細胞2–3通道在10%血清的培養基:90% SFM混合物。大多數的細胞系可以被認為是完全適應后100% SFM 3通道。有時你可能會得到你過去的某一步甚至細胞之前100% SFM有麻煩。如果發生這種情況,回去和傳代細胞2–3次血清前比補充媒體的無血清培養基。

三、對無血清培養的思考

總的來說,在無血清培養細胞的滲透壓,pH,溫度,機械力極端敏感,酶處理。

1.抗生素

不要在無血清培養基中使用抗生素。如果你這樣做,我們建議您使用5到10倍不到你會在血清培養基中。這是因為血清蛋白會結合一定量的抗生素添加;沒有這些血清蛋白抗生素的水平可能是某些細胞的毒性。

2.高密度

細胞必須與活力> 90%適應中的生長對數期。連續的適應可能是必要的。播種文化在一個更高的密度比正常在各通道在SFM適應可以幫助過程。因為有些部分的細胞不可能在新的文化環境中生存,有更多的細胞會增加活細胞數進一步通道。

3.叢生

細胞聚集往往發生在適應SFM。我們建議你輕輕地成團塊打破他們當傳代細胞。

4.形態

這是不尋常的在適應SFM后見細胞形態略有變化。只要倍增時間和細胞活性保持良好,在形態上的細微變化,不應該是一個值得關注的理由。

四、對培養的適應

為適應SFM的另一種方法涉及使用“條件培養基”。介質的細胞已生長在一個完整的通道,如果您選擇這種方法,可以促進適應如下:

通道1,100%血清的培養基

通道2通道50%中從1:50左右SFM

通道3通道50%中從2:50左右SFM
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