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一抗的選擇要點和技巧,必看!

2021-09-08 9:56 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
免疫組化實驗是一種很嚴密的實驗,對抗體的選擇哪也有很高的要求,免疫組化所有的抗體主要是一抗,如何選擇免疫組化中的一抗?下面我們就來了解下。

(1)選擇單克隆還是多克隆抗體。由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體,單克隆抗體能目標明確地與單一特異抗原決定簇結合,就象導彈精確地命中目標一樣。另一方面,即使是同一個抗原決定簇,在機體內也可以由好幾種克隆產生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應中,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對較低;而多克隆抗體特異性稍弱,抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現非特異性染色(可以通過封閉等有所避免)。

(2)種屬來源。一般家兔來源的抗體多是多克??;而小鼠來源的抗體多是單克隆,但也有另外。這條主要要與后面的二抗來源相匹配。

(3)實驗目的是檢測什么種屬的抗原,即species reactivity。這一點很重要,一般說明書上都有注明,如小鼠Ms、大鼠Rat、人Hum等等。

(4)能否做免疫組化。一般一抗說明書都會注明做WB、IHC、ICC、IF等,建議最好選擇注明的抗體,因為一般都是經過文章證明。

(5)檢測標本類型。用于檢測石蠟切片還是冰凍切片,一般能做石蠟切片的抗體,可能都可以用來檢測冰凍切片,但能做冰凍切片的抗體,不一定能檢測石蠟切片中的抗原。

(6)生產廠家。國外著名抗體生產商原裝抗體質量一般沒問題,但有點貴;而國內分裝廠家用的一抗工作液,價格便宜,但有時結果的穩定性和重復性稍差,尤其不同批次重復性較差。

(7)價格與質量的矛盾。一抗原裝質量可能會好點,因為許多一抗避免反復凍融,且在稀釋液中穩定性較差(若時間長),但價格較貴。
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