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尼氏染色液(甲基紫法)使用說明書

2021-08-30 15:23 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
介紹:神經元細胞體包括一個具有皺褶核膜的大細胞核、稀疏的染色質和一個明顯的核仁。在細胞體中細胞質是尼氏顆粒,即能夠代表粗面內質網并在很多神經元中產生特異的斑點狀嗜堿性表現的嗜堿性顆粒。尼氏顆??梢杂煤芏嗳旧珌盹@示如中性紅、亞甲基藍、甲苯胺藍和甲基紫等。染色的變異、pH和分化的時間使一些染色既可以僅突出尼氏物質,也可以顯示神經元的細胞核和神經膠質。尼氏體(Nissl body)或稱尼氏小體是分布于神經細胞胞質內的三角形或橢圓形小塊狀物質,能被堿性染料如硫堇、亞甲藍、甲苯胺藍和焦油紫等染料染成紫藍色。各種神經細胞內都含有尼氏體,但其形狀、數量、分布位置常常不同。尼氏體也存在于樹突中,但不在于軸突和包體的軸丘。尼氏體會因為生理狀態的變化而變化,尼氏體是神經元內合成蛋白質合成的重要部位,當神經元受到刺激后,包體內的尼氏體會明顯減少。

尼氏染色試劑盒(Nissl Stain,甲基紫法)主要特點是操作簡便、染色穩定、分化時間短,適用范圍廣,可以用于石蠟組織切片的尼氏物質、神經元等的染色,尼氏體的存在和消失是神經細胞是否受損的重要指標,當發生腦炎、腦缺血、軸突反應等情況時,尼氏體會發生溶解甚至消失。

自備材料:
1、中性福爾馬林溶液
2、顯微鏡
3、蒸餾水

參考操作(僅供參考):
1、固定:可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福爾馬林溶液。
2、組織切片: 石蠟切片(見注意事項4)。
3、切片脫蠟入水。
4、用甲基紫染色液涂片,染色。
5、蒸餾水沖洗。
6、用Nissl Differentiation分化,直到大部分染色被消除。
7、直接經無水乙醇至二甲苯,顯微鏡下觀察。
8、如果有必要,重復步驟6和7。重復時,給予少量Nissol Differentiation分化。
9、在二甲苯中充分沖洗。加拿大香脂或DPX封片。

染色結果:
尼氏物質或尼氏小體   紫黑藍色
神經元   淡紫藍色
細胞核   紫藍色

注意事項:
1、 尼氏體離體后容易溶解,所以組織取出后應立即固定,否則難以著色。
2、 組織固定起著非常重要的作用,固定可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福爾馬林溶液。
3、 本染色液對石蠟組織切片的尼氏染色效果較好。
4、 如果要證實尼氏物質的存在,那么染色后必須要用Nissol Differentiation分化。
5、 石蠟切片厚度7~10?m或25?m(皮質神經元密度的評估要用25?m厚的切片)。
6、 染色后的標本務必避光保存,否則容易褪色。
7、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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